Расшифровка анализа на сифилис: отрицательный, ложный и другие

Какие анализы используются в диагностике сифилиса?

Содержание:

Выявить наличие патогенного возбудителя сифилиса помогают серологические тесты:

  1. Реакция Вассермана (RW). Основана на связывании комплемента с комплексом антиген-антитело. Для идентификации применяется гемолитическая система. Повышению чувствительности пробы способствует кардиолипиновый антиген. Если значение положительно, на бланке с направлением ставятся кресты. Исследования крови с применением реакции Вассермана в некоторых случаях дают ложное показание.

    Если венеролог подозревает наличие у пациента трепонемной инфекции при получении положительного анализа, назначается диагностика с применением других методов.

  2. Метод микропреципитации (РМПА). Для исследования крови применяются механизмы, аналогичные реакции Вассермана. Этот способ показывает положительные результаты спустя месяц после возникновения у пациента твердых шанкров. При получении сомнительных анализов проводится трепонемный вид исследования крови.
  3. Способ плазменных реагинов (RPR). Является аналогом RW и используется для осуществления обследования пациентов, не имеющих симптомы инфицирования трепонемами, а также для подтверждения заболевания.
  4. Иммуноблот. Метод считается сверхточным и высокочувствительным. Исследуется кровь на сифилис этим способом нечасто. Обычно способом иммуноблоттинга изучают биоматериал новорожденных. Результат анализа получают в течение длительного периода, поэтому он не относится к экспресс-диагностикам.
  5. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГ). Этот экспресс-тест позволяет за короткий срок поставить верный диагноз и назначить пациенту полный курс лечения. Микрореакция способна показать положительные результаты через месяц после инфицирования бледной трепонемой. Метод применяется для диагностики первой стадии заболевания, сопровождающейся язвами и высыпаниями.
  6. Иммуноферментный анализ. Метод с применением реакции антиген-антитело относится к высокочувствительным и применяется для исследования доноров, беременных, подтверждения диагноза при получении положительного результата.

  Таблетки, уколы и препараты для лечения сифилиса

12. РПГА

Этот анализ крови на сифилис называется реакцией пассивной гемагглютинации (сокращенно, кровь на РПГА, ТРПГА).

Антиген для РПГА приготавливают из эритроцитов барана, покрытых фрагментами бледных трепонем (полученных от инфицированных кроликов (см. рисунок 4)). Для анализа используется венозная кровь (плазма или инактивированная сыворотка) пациента.

При добавлении антигена в сыворотку пациента с сифилисом происходит образование комплекса АГ-АТ, который приводит к агглютинации эритроцитов. агглютинация определяется субъективно врачом-лаборантом.

Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Рисунок 3 – Схема РПГА (реакция пассивной гемагглютинации)

Проба оценивается как положительная при появлении агглютинатов равномерной розовой окраски. Окрашивание преципитата в красный свидетельствует об осаждении эритроцитов. РПГА является высокочувствительной и высокоспецифичной.

12.1. Реакция микрогемагглютинации

Она является упрощённым вариантом РПГА. Отличается от пробы, описанной выше, меньшим количеством антигена, разбавителя и сыворотки крови для выполнения реакции. Через 4 часа после инкубации сыворотки можно оценить пробу. Используется при скрининговых и массовых обследованиях на сифилис.

Алгоритм диагностирования

  • При нахождении сифилиса в первичной фазе (до 60 дней с момента инфицирования), возбудителя отыскивают на темном фоне или используют для их обнаружения флюоресцирующие антитела.
  • Если патология находится в первичной, вторичной или скрытой форме применяют РМП и ИФА. Подтвердить результаты помогает РПГА анализ крови на сифилис.
  • При рецидивах вторичной инфекции анализируют отделяемое изъязвлений и высыпаний. Из образцов извлекают возбудителей, изучают их с помощью микроскопии.
  • Когда заболевание входит в третичную фазу, у 1/3 пациентов РМП отрицательная. При этом результаты ИФА и РПГА положительны. Однако они не всегда указывают на третичный период, а подтверждают, что человек раньше перенес инфекцию. Слабоположительный тест – доказательство полного излечения, а не развития третичной фазы.
  • Подтверждая врожденный сифилис, анализ крови берут у матери и младенца. Сравнивают данные тестов РМП. Учитывают то, что у малыша ИФА и РПГА положительны. Подтверждают диагноз, используя методику иммуноблоттинга.

Сифилис, как любая системная патология, поражает весь организм. Поэтому обследование на него проходят при беременности, перед абортом. Пациенткам делают РМП, ИФА, РПГА.

Hepatitis C virus (HCV, гепатит C), core, NS3, NS4, NS5 антигены, IgG антитела, кровь

Подготовка к исследованию: Исключение курения за 30 минут до забора крови Исследуемый материал: Взятие крови Как сдавать анализ крови без боли?

Гепатит С – инфекционное заболевание, вызванное РНК вирусом гепатита С. Существует шесть генотипов вируса гепатита С, которые разделены на подтипы.
Гепатит С характеризуется воспалением и повреждением печени. Инфекция гепатита С часто протекает безсимптомно, но хроническое течение заболевания может привести к циррозу печени. В некоторых случаях возможно развитие рака печени и опасного для жизни варикозного расширения вен пищевода и желудка.

Около 150-200 миллионов человек заражены гепатитом С. Гепатит С – причина 27% случаев цирроза печени и 25% случаев гепатоцеллюлярной карциномы (рака печени).

Основной путь передачи инфекции в развитых странах – внутривенное употребление наркотиков. В развивающихся странах вирус передается чаще при переливании крови и медицинских процедурах, а также при татуаже. В 20% случаев причина заражения остается невыясненной. Возможные пути передачи гепатита С – пересадка органов и костного мозга, вертикальный путь – от матери ребенку во время родов. В редких случаях гепатит С может передаваться при незащищенных половых контактах, а также совместном использовании средств личной гигиены (бритва, зубная щетка).

Гепатит С сопровождается острой симптоматикой лишь в 15% случаев. Проявления, как правило, мягкие – снижение веса, потеря аппетита, тошнота, мышечные боли, боли в суставах, усталость. У приблизительно 85% инфицированных заболевание переходит в хроническую форму. Обычно хронический гепатит С протекает без клинических проявлений в течение первых десяти лет. Жировые изменения в печени наблюдаются примерно у 50% больных и определяются перед развитием цирроза.

Распространенность гепатита С у иммунокомпрометированных лиц гораздо выше, чем у здоровых людей. Гепатит С у ВИЧ-инфицированных, реципиентов органов, а также при гипогаммаглобулинемии (снижении уровня иммуноглобулинов) отличается быстрым течением и переходом в цирроз печени.

Предполагается, что 5-50% инфицированных вирусом гепатита С не знают о своем статусе. Тестирование рекомендовано группам риска – лицам, употребляющим внутривенные наркотики, а также реципиентам крови (обязательно в случае гемотрансфузии, проведенной до 1992 года,) и лицам, имеющим татуировки. Скрининг также рекомендован при повышении уровня печеночных трансаминаз.

Антитела класса IgG к core-антигену (внутреннему, сердцевинному белку вируса) и NS3, NS4, NS5-белкам вируса гепатита С синтезируются через 11-12 недель после инфицирования и достигают пика к 5-6 месяцу. Иммуноглобулины класса G синтезируются на протяжении всего периода заболевания, а также во время реконвалесценции (периода выздоровления). Определение уровня антител не дает возможности дифференцировать острую и хроническую формы гепатита С.

Данный анализ позволяет выявить антитела класса IgG к белкам вируса гепатита С. Анализ помогает диагностировать гепатит С.

Метод

Иммуно-ферментный анализ – ИФА

4. ДНК-гибридизация

ДНК-гибридизация выполняется in vitro и основана на полном или частичном соединении двух одноцепочечных молекул ДНК в одну молекулу. В случае полного соответствия комплементарных фрагментов объединение происходит легко. Если комплементарное соответствие частичное, то объединение цепочек ДНК происходит медленно. На основании времени слияния цепей можно оценить степень комплементарности.

При нагреве ДНК в буферном растворе разрываются водородные связи азотистыми основаниями, являющимися комплементарными, в результате цепочки ДНК расходятся. Далее получают препарат из двух денатурированных дезоксирибонуклеиновых кислот. При охлаждении одноцепочечные участки ренатурируют. Образуется так называемый гибрид ДНК.

Метод позволяет оценить и анализировать скорость отжига, учитывая особенности (сходства и различия) ДНК между видами или внутри вида.

Применение ДНК-зонда заключается в гибридизации меченого фрагмента ДНК со специфичным участком ДНК для идентификации комплементарных последовательностей нуклеотидов. Для метки зонда используется группа ненасыщенных атомов (хромофоры) или радиоактивные изотопы.

ДНК–зонд применяют для гетерогенного и гомогенного детектирования нуклеиновых кислот. Роль зонда заключается в определении участков, на которых произошло слияние мишень-зонд. Детектирование в гомогенной системе имеет преимущество – позволяет отследить гибридизацию молекул ДНК в реальном времени.

Суть метода сводится в денатурации ДНК и ренатурации (воссоединения цепочек ДНК). Процесс ренатурации нуклеиновой кислоты и ДНК-зонда заканчивается образованием «гибрида».

Специфические последовательности нуклеиновых кислот гибридизуются с ДНК–зондом и, таким образом, выявляются и позволяют оценить количество ДНК в исследуемом материале.

6. Нетрепонемные тесты

Это тесты определения антител IgG и IgM к стандартизированному кардиолипиновому антигену. Их существенным недостатком является сравнительно небольшая специфичность.

Низкая стоимость и простота выполнения позволяют отнести эти тесты к отборочным диагностическим, необходимым для установки предварительного диагноза и скрининга среди населения.

Читайте также:  Контагиозный моллюск у женщин: фото, лечение, причины и симптомы

Именно нетрепонемные тесты сдаются при оформлении медицинской книжки, устройстве на работу, постановке на учет в женской консультации.

Недостатки:

  1. 1Минимальная чувствительность в стадии сифилиса первичного – 70%;
  2. 2Минимальная чувствительность в стадии сифилиса позднего – 30%;
  3. 3Возможность появления ложноотрицательных и ложноположительных результатов;
  4. 4Трудоёмкость выполнения РСК.

Преимущества:

  1. 1Относительно маленькая стоимость производства тестов;
  2. 2Получение быстрого ответа;
  3. 3Возможность их применения для скрининга.

Получение ложноположительных или слабоположительных проб возможно в следующих случаях:

  1. 1Нарушение технологии выполнения, при блокировании комплекса АГ-АТ.
  2. 2Наличие у больного аутоиммунных заболеваний (ревматоидный артирит, ревматизм, склеродермия, системная красная волчанка, саркоидоз и др.).
  3. 3Злокачественные новообразования.
  4. 4Вирусные и бактериальные инфекции.
  5. 5Эндокринные заболевания (аутоиммунный тиреоидит, сахарный диабет).
  6. 6Беременность.
  7. 7Употребление алкоголя.
  8. 8Приём жирной пищи.
  9. 9Старческий возраст.

Как видно из списка, существует достаточно  причин для неверного результата. Поэтому к нему следует весьма настороженно относиться. Рассмотрим наряду с РСК ещё две пробы. Это реакция микропреципитации и VDLR (ее модификация).

Как подготовиться к процедуре

Для анализа крови на сифилис в разных случаях могут брать капиллярную или венозную кровь. Домашние экспресс-тесты дают ответ по одной капле крови из пальца. В этом случае специальной подготовки не требуется. Общая рекомендация: воздерживаться от курения непосредственно перед взятием пробы, а от алкоголя – на протяжении 24 часов.

Похожие требования выдвигаются и при заборе венозной крови. Для пациентов, имеющих проблемы с иммунитетом, дополнительно не советуют заниматься тяжелым физическим трудом накануне анализов. За день до взятия проб лучше употреблять легкую пищу, хорошо выспаться.

Сдача венозной крови проводится утром натощак.

Иллюстрация 2

2. Микроскопия Treponema pallidum в тёмном поле

Этот метод основывается на непосредственном обнаружении бледной трепонемы в исследуемом материале с помощью микроскопа и специальных приспособлений (чаще всего отделяемое эрозий и язв, реже спинномозговая жидкость и другие субстраты).

С помощью скарификации, соскоба, сдавливания с эрозий и язвенных дефектов получают экссудат, затем исследуют в микроскоп подготовленный препарат.

Обычно бледные трепонемы выявляют в препарате, полученном из шанкра, из очагов вторичного свежего, вторичного рецидивного сифилиса, а также пунктата лимфоузлов, плаценты.

Основанный на феномене свечения мелких частиц в тёмном поле при попадании луча света (феномен Тиндаля), метод прекрасно позволяет дифференцировать возбудителя сифилиса от других трепонем на основании морфологических отличий и отличий в способах передвижения бактерии.

Для микроскопии используют специальный темнопольный конденсор соответствующего оптического разрешения. Препарат получают способом раздавленной капли (каплю материала наносят на чистое обезжиренное предметное стекло и закрывают очень тонким покровным).

На покровное стекло капают иммерсионное масло. С помощью поворота тубуса и поворота увеличивающей линзы регулируют нужное освещение.

В тёмном поле микроскопа обнаруживаются клетки крови, эпителиальные клетки и сам возбудитель сифилиса. Бледная трепонема выглядит как спираль, очень тонкая, излучающая серебристый цвет, с плавными движениями.

Темнопольная микроскопия как метод визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале

Рисунок 2 – Темнопольная микроскопия как способ визуализации бледной трепонемы в исследуемом материале. Источник иллюстрации – CDC

Treponema pallidum необходимо отличать от других трепонем, в том числе и Tr. refringens, которая может содержаться в ротоглотке и на слизистой половых органов. Эта бактерия совершает хаотичные движения, имеет широкие и несимметричные, довольно грубые завитки. Кроме того, Treponema pallidum отличают от Tr. Microdentium, Tr. Buccalis и Tr. vincenti.

Визуализация бактерий в тёмном поле иногда дополняется реакцией флюоресценции. Для этого меченые флюоресцирующим красителем противотрепонемные АТ добавляют в нативный материал. При этом образуется комплекс, называемый антиген-антитело (сокращенно АГ-АТ), который и является объектом для исследования с помощью люминесцентного микроскопа.

Таблица расшифровки биохимического анализа крови

Венозную кровь на биохимию берут утром, с условием, что пациент последние 8-10 часов ничего не ел. Показатели биохимического анализа позволят врачу судить о наличии воспалительных процессов во всем организме, нарушениях процентного содержания микроэлементов. Нормы анализов:

Отклонение нормы – онкология, ревматизм.

Глюкоза (анализ на с-пептид)

Повышение нормы сахара – предрасположенность к диабету.

Повышение остаточного азота – сердечная недостаточность, болезни почек, опухоли.

52-98 мкмоль/л женщины;

мкмоль/л мужчины.

Повышен при обезвоживании, излишнем употреблении мяса, гипертиреозе.

Снижен при строгой диете, у веганов, заболеваниях печени.

Повышен – заболевание печени, сердечно-сосудистой системы.

Повышен при гепатите.

5,0-60 ед/л дети от рождения до 2 лет;

ед/л взрослые и дети старше 2 лет.

Повышен при панкриатите.

До 30 ед/л у женщин;

до 42 ед/л у мужчин.

Повышен при нарушениях работы печени.

Завышен показатель при сахарном диабете, перитоните, почечных заболеваниях.

Снижен при гепатите.

До 48,5 ед/л у женщин;

до 33,4 ед/л у мужчин.

Повышен при болезнях печени, поджелудочной железы.

Превышение нормы при повреждении сердечной мышцы, циррозе печени.

До 245 ед/л – женщины; до 275 ед/л – мужчины.

Превышение нормы при инфаркте легких, почек, при метастазах рака костей.

11. РИБТ

Реакция иммобилизации бледных трепонем (сокращено РИБТ, РИТ) одна из сложных серологических проб, требующих значительных усилий и финансовых затрат. РИБТ применяют все реже, но актуальность ее сохраняется в диагностике скрытого сифилиса.

Большое значение она несёт в распознавании ложноположительных результатов у беременных женщин и основывается на иммобилизации бактерий в присутствии иммобилизинов – поздних антител.

Результат оценивается на процентном количестве (%) иммобилизированных трепонем с помощью специальной таблицы:

  1. 1От 0 до 20 – отрицательная проба.
  2. 2От 21 до 50 – слабоположительная проба.
  3. 3От 50 до 100 – положительная реакция.

Ложноположительные результаты также возможны при применении РИБТ. Так, неверный ответ возможен при инфицировании тропическими трепанематозами, а также, при туберкулёзе, циррозе печени, саркоидозе и пациентов старческого возраста.

14. Иммуноблоттинг

Иммуноблоттинг – высокочувствительный метод, модификация простого ИФА. Реакция основана на электрофорезе с разделением антигенов бледных трепонем.

Разделенные иммунодетерминанты переносят на нитроцеллюлозную бумагу и проявляют в ИФА. Далее инкубируют сыворотку и смывают не связавшиеся антитела. Полученный материал обрабатывают иммуноглобулинами (IgМ или IgG), меченными ферментом.

Результаты специфического исследования

Трепонемные тесты сложны и дорогостоящи по сравнению с нетрепонемными. Существует несколько видов анализов, используемых для диагностики сифилиса: РСКт, РИБТ, РИФ, РПГА, ИФА и иммуноблоттинг). Одним из точных специфических исследований является РИБТ-анализ. Результат теста может быть представлен лабораторией в процентах.

  • 20% соответствует отрицательному результату («–»)
  • 21-30% сомнительный анализ («++» или «2+»)
  • 31-50% слабоположительный («+++»,«3+»)
  • 51% и более соответствует положительному результату

Иммуноблоттинг один из современных и точных способов диагностики заболевания. Обычно назначается для того, чтобы подтвердить или опровергнуть результаты первого исследования. Обнаружение в крови антител типа IgG и IgM отмечается полосками. Результаты теста расшифровываются в сравнении с нетрепонемным тестом.

Если оба результата отрицательные, пациент здоров или заражение находится на первой неделе развития. Оба положительных результат свидетельствуют о наличии сифилиса или другого, возможно, аутоиммунного заболевания.

Положительный иммуноблоттинг-тест после отрицательного нетрепонемного исследования означает присутствие сифилиса, аутоиммунного или онкологического заболевания.

Может присутствовать положительная реакция у беременных. Отрицательный иммуноблоттинг-тест после положительного нетрепонемного исследования означает отсутствие заболевания.

Ложноположительный результат и его причины

Иногда фиксируется результат других тестов и ИФА ложноположительный на сифилис. Именно поэтому рекомендуется проводить 2 — 3 вспомогательных метода и через некоторое время повторять иммуноферментный анализ.

Анализы на сифилис РМП и RPR – что это, когда нужно, расшифровка ...

Подобные неточности встречаются редко, они обусловлены преимущественно такими факторами:

  • беременность;
  • хронические заболевания;
  • недавняя вакцинация;
  • травмы.

Ложноположительные результаты разделяют на острые и хронические, в зависимости от характера спровоцировавшего их фактора.

Способы поиска трепонемы или ее следов

В основу лабораторных методов диагностики сифилиса по крови положена способность организма давать иммунный ответ на появление возбудителя. Поскольку исследуют плазму или сыворотку крови, то всю группу реакций назвали серологическими.

Серологическая диагностика сифилиса включает нетрепонемные и трепонемные реакции выявления антител. Первые чаще используют для скрининга и оценки эффективности лечения, а последние – для диагностики.

Впервые серодиагностику сифилиса провел Август Вассерман в 1906 году. До сегодняшнего времени она не потеряла актуальности и называется в честь разработчика – реакция Вассермана (РВ, RW) или реакция связывания комплемента (РСК).

За 100 лет лабораторная практика значительно развилась, и теперь антитела IgM и IgG выявляют следующими способами (таблица 1).

Тип Русское название теста Английское название теста
Нетрепонемные Тест быстрых плазменных реагинов (БПР) или реакция преципитации (РПР) с кардиолипиновым антигеном или микрореакция преципитации (МР Rapid Plasma Reagins (RPR)
Количественная микрореакция преципитации (МРП) с плазмой или инактивированной сывороткой
Тест отбора реагинов Reagin Screen Test (RST)
Тест с толуидиновым красным и непрогретой сывороткой Toluidin Red Unheated Serum Test (TRUST)
Тест определения активных реагинов плазмы Unheated Serum Reagins (USR)
Лаборатория изучения венерических заболеваний Venereal Disease Research Laboratory (VDRL)
Трепонемные Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Fluorescent treponemal antibody (FTA)
Реакция иммобилизации трепонем (РИТ) Treponema pallidum immobilization test (TPI)
Иммуноферментный анализ (ИФА) Enzymelynked immunosorbent assay (ELISA)
Реакция связывания комплемента (РСК) Reagin Wasserman (RW)
Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) Syphilis TPHA-Test (Treponema pallidum haemagglutination test)
Методом иммуноблота Western-blot

Положительные результаты микроскопии

В выявлении возбудителя данного заболевания широко применяются микроскопические методы. К ним относятся темнопольная микроскопия, исследование по Романовскому-Гимзе и импрегнация трепонем серебром. Материалом для исследования являются:

  • Окраска по Романовскому-Гимзе
    содержимое шанкра, эрозий и язвочек;
  • пунктат лимфатических узлов;
  • мазок с пораженных слизистых.
Читайте также:  Крауроз вульвы или атрофия наружных половых органов

При сифилисе положительна темнопольная микроскопия. При направлении света на предметное стекло с препаратом больного бледные трепонемы начинают светиться на полностью темном фоне. Они имеют тонкую, спиралевидную форму и способны к различным типам движений (поступательным, вращательным, сгибательным). Трепонемы имеют несколько завитков.

При сифилитической инфекции очень информативен анализ по методу Романовского-Гимзе. Препарат окрашивается специальными веществами, высушивается и исследуется под микроскопом. Для этого применяется масляная среда. Положительным анализ является в том случае, если визуально обнаруживаются микробные клетки. Отличить бледных трепонем от других спирохет позволяет розовый цвет. Реже в диагностике сифилиса применяется метод импрегнации серебром, при котором возбудитель окрашивается в темно-коричневый или черный цвет.

10. РИФ

Данная реакция (сокращенно РИФ) используется для диагностики сифилиса, в том числе и скрытых форм, и перепроверки положительных и ложноположительных проб.

РИФ основана на свечении меченых антител при соединении с комплексом антиген-антитело под кварцевой лампой. Метод начал применяться в 60-х годах и отличался простотой выполнения и высокой специфичностью (которая немного уступает РИБТ).

Он имеет несколько модификаций: РИФ-10, РИФ-200 и РИФ-abs.

Наиболее чувствительна РИФ в разведении 10 раз, а остальные – более специфичны. РИФ проводится в двух фазах. К АГ добавляют сыворотку крови пациента. Образуется комплекс АГ-АТ, который исследуется в следующей фазе. Далее меченный с помощью флюоохрома комплекс идентифицируют при микроскопии. Если не наблюдается свечение, это указывает на отсутствие специфических АТ в сыворотке крови.

РИФ-200 является наиболее ценным из всех разведений. Метод предназначен для диагностики различных форм сифилиса, особенно скрытого сифилиса и перепроверки положительных проб.

Как расшифровать результат неспецифического обследования

Расшифровка анализа на сифилис, проведенного с помощью неспецифических тестов, может содержать:

  • четыре креста (++++), означающих резко положительную пробу;
  • три креста (+++) — положительная реакция;
  • два креста (++) — слабоположительная проба;
  • один крест (+) — отрицательный или сомнительный результат;
  • обозначение знаком минус (-) — заболевания нет.

Как понять результаты специфического исследования

При использовании реакции иммуноферментации (ИФА) в крови пациента определяются иммуноглобулины (обозначения IgM, IgA, IgG):

  1. При выявлении IgA можно говорить о недавнем инфицировании, произошедшем около двух недель назад.
  2. Обнаружение иммуноглобулинов класса A и M позволяет определить первую стадию заболевания и окончание инкубационного периода.
  3. Получение сразу трех видов антител класса А, М, G указывает на прогрессирование сифилиса и борьбу организма с инфекцией.
  4. При выявлении IgG имеет смысл говорить об излечении сифилиса и правильно проведенной терапии.

Результаты тестов могут выражаться в процентах:

  • 20% — отрицательно;
  • 20-30% — сомнительный;
  • 30-50% — слабоположительный;
  • более 50% — положительный анализ.

Не всем людям, получившим результаты исследования удается расшифровать числа, представленные в виде отношения. Если в бланке указаны значения 1:2 — 1:800, говорить об инфицировании рано.

расшифровка

У части пациентов, прошедших курс терапии, антитела обнаруживаются в течение длительного периода.

При их росте врач подозревает наличие в организме пациента патогенного возбудителя. Титры снижаются при правильном лечении.

13. Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (сокращенно ИФА) базируется на специфической реакции антиген-антитело. Биологический материал (сыворотка крови пациента, ликвор) вносят в лунки, на твердой поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы. Исследуемый материал инкубируют, затем отмывают антитела, не связавшиеся с антигенами (см. рисунок 5).

Идентификация полученного комплекса осуществляется на этапе ферментации с помощью иммунной сыворотки, меченной ферментом. При химической реакции фермент окрашивает полученные комплексы. Интенсивность окрашивания зависит от количества специфических антител в крови пациента и фиксируется спектрофотометром.

Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Рисунок 4 – Схема ИФА (иммуноферментного анализа)

Чувствительность ИФА составляет более 95% . Метод используется в автоматизированном режиме для исследования декретируемых групп населения: доноров, беременных и других, для уточнения диагноза при положительных и ложноположительных нетрепонемных тестах.

3. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР)

ПЦР, разработанная в 1991 году для обнаружения молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) бледной трепонемы, является высокочувствительным и специфичным, позволяет выявить фрагменты ДНК возбудителя.

Базируется данный анализ на копировании коротких участков ДНК бледной спирохеты, который удовлетворяет заданным параметрам и присутствует в образце. Всё это выполняется в искусственных условиях (in vitro). Реакция проводится в приборе – амплификаторе, который обеспечивает периодизацию температурных циклов. Происходит охлаждение с последующим нагреванием пробирок с погрешностью в 0,1˚С.

ДНК-матрицу прогревают в течение 2 минут при температуре 92-98˚С (максимальная температура используется, если полимераза термостабильна). При нагревании цепи ДНК расходятся из-за распада водородных связей между ними. В стадии отжига температуру реакции снижают для связывания праймера с одноцепочечной матрицей.

Отжиг занимает около 30 секунд, в течение этого времени синтезируются сотни нуклеотидов. Вновь синтезируемые молекулы копируются полимеразой, в результате многократно увеличиваются специфические фрагменты дезоксирибонуклеиновой кислоты. Последующая детекция фрагментов проводится с помощью электрофореза в геле агар.

ПЦР-диагностика сифилиса пока носит экспериментальный характер, но оправдана при выявлении врождённой инфекции, в сложных диагностических случаях или при минимальном содержании бледных трепонем в исследуемом материале.

5. Заражение лабораторных животных

Высокая чувствительность кроликов к Treponema pallidum (порядка 99,9%) позволяет применять их в диагностике сифилитической инфекции.

Заражение кроликов проводится в научно-исследовательских центрах и является «золотым стандартом» оценки чувствительности других методов.

Вернёмся к трепонемным и нетрепонемным тестам, так как они используются чаще всего. Рассмотрим их преимущества и недостатки, а также ошибки в интерпретации результатов.

Общее описание

Анализ крови на сифилис (RW)
Реакция Вассермана (RW) — это самая популярная иммунологическая реакция, применяемая для диагностики сифилиса, начиная со времени своего открытия в 1906 году. RW относится к группе реакций связывания комплемента (РСК) и основывается на способности сыворотки крови больного сифилисом образовывать комплекс с соответствующими антигенами. Современные методики РСК, применяемые для диагностики сифилиса, значительно отличаются по своим антигенам от классической реакции Вассермана, однако, термин «реакция Вассермана» за ними традиционно сохраняется.

В крови заразившегося человека появляются антитела, выработанные иммунной системой. В возбудителе заболевания — бледной трепонеме (Treponema pallidum), содержится антиген кардиолипин, который вызывает выработку антител, определяемых с помощью RW. Положительная реакция Вассермана как раз и свидетельствует о присутствии таких антител в крови человека и на этом основании делается вывод о наличии заболевания.

Показателем результата исследования в РСК служит реакция гемолиза. В реакции участвуют два компонента: эритроциты барана и гемолитическая сыворотка. Гемолитическую сыворотку получают путем иммунизации кролика эритроцитами барана. Её инактивируют в течение 30 минут при температуре 56°С. Результаты РСК оценивают в зависимости от наличия или отсутствия гемолиза в опытных пробирках. Наличие гемолиза объясняется тем, что если в испытуемой сыворотке отсутствуют сифилитические антитела, то реакция антиген-антитело не происходит, и весь комплемент идет на реакцию бараньи эритроциты-гемолизин. А если имеются специфические антитела, комплемент полностью уходит на реакцию антиген-антитело и гемолиза не происходит.

Реакция Вассермана (RW)
Все ингредиенты для реакции Вассермана берутся в одинаковом объеме — 0,5 или 0,25 мл. Для прочной фиксации комплемента на специфическом комплексе, смесь исследуемой сыворотки, антигена и комплемента помещают в термостат при температуре 37° на 45-60 мин. (I фаза реакции), после чего вносят гемолитическую систему, состоящую из бараньих эритроцитов и гемолитической сыворотки (II фаза реакции). Далее пробирки вновь помещают в термостат на 30-60 минут до наступления гемолиза в контроле, в котором антиген заменяют физиологическим раствором, а вместо исследуемой сыворотки вносят физиологический раствор. Антигены для реакции Вассермана выпускают в готовом виде с указанием титра и способа разведения.

Максимальную позитивность реакции Вассермана принято обозначать количеством крестов: ++++ (резко положительная реакция) — свидетельствует о полной задержке гемолиза; +++ (положительная реакция) — соответствует значительной задержке гемолиза, ++ (слабоположительная реакция) — свидетельство частичной задержки гемолиза, + (сомнительная реакция) — соответствует о незначительной вдержке гемолиза. Отрицательная RW характеризуется полным гемолизом во всех пробирках опыта.

Однако, иногда возможны и ложноположительные результаты — это связано с тем, что кардиолипин в некотором количестве содержится и в клетках человеческого организма. Иммунная система человека не создает антител против «собственного» кардиолипина, но из этого правила бывают и исключения, благодаря которым положительная реакция Вассермана возникает у совершенно здорового человека. Особенно часто это наблюдается после перенесенных тяжелых вирусных и прочих заболеваний — пневмонии, малярии, болезней печени и крови, при беременности, т.е. в моменты серьезного ослабления иммунитета.

Если врач подозревает у пациента ложноположительный результат на реакцию Вассермана, то он может назначить ему ряд дополнительных исследований, которые обычно применяются при диагностике заболеваний, передающихся половым путем.

Заболевания и случаи, при которых врач может назначить анализ крови на RW

  • Анализ крови на RW при беременности
    Сифилис.
  • Подозрение на сифилис у людей, находящихся в контакте с больными сифилисом.
  • Беременность.
  • Наркотическая зависимость.
  • Прерывание беременности.
  • Лихорадка, сопровождающаяся увеличением регионарных лимфатических узлов.
  • Первичное посещение поликлиники.
  • Поступление в стационар на лечение.
  • Лечение в психиатрическом или неврологическом стационаре.
  • Донорство крови, тканей, спермы, других секретов организма.
  • Работа в сфере услуг, торговли, медицинского обслуживания, социальной и образовательной сферах.
Читайте также:  Нужна ли операция при недержании мочи у женщин: виды операций

Проведение процедуры сдачи анализа крови на RW

Кровь на RW сдается только натощак. Крайний прием пищи должен быть не позднее 6 часов до сдачи анализа. Медицинский работник усаживает пациента или укладывает на кушетку и осуществляет забор 8-10 мл крови из локтевой вены.

Если анализ необходимо сделать младенцу, то забор осуществляется из черепной или яремной вены.

Подготовка с сдаче анализа крови на RW

За 1—2 суток до сдачи анализа следует прекратить употребление спиртных напитков. Также не рекомендуется есть жирную пищу — она может исказить результат. В период подготовки к анализу следует воздержаться от приема препаратов наперстянки.

Противопоказания

Результат анализа будет ложным, если:

  • у пациента повышена температура тела,
  • человек болен инфекционным заболеванием или только переболел им,
  • у женщины период менструации,
  • беременная в последние недели перед родами,
  • первые 10 дней после родов,
  • первые 10 дней жизни младенца.

Анализ крови на гормоны щитовидной железы

Лабораторные анализы на гормоны щитовидной железы помогают доктору определить, насколько правильно функционирует этот важный эндокринный орган. Существует несколько основных параметров, по которым можно ориентироваться, существуют ли сбои в работе щитовидной железы. Анализатор аббревиатуры главных анализов, сдаваемых на гормоны щитовидки:

  • ТТГ – тиреотропный гормон. Вырабатывается в головном мозге (гипофизе) и контролирует работу щитовидной железы. Норма 0,45 – 4,10 мЕд/л.
  • ТЗ общий – трийодтиронин. Анализ проводится при гипертиреозе (избыточной работе щитовидной железы). Норма 1,05-3,15 нмоль/л. У пожилых людей норма занижена.
  • ТТ4 – тироксин общий. Отклонение от нормы говорит о снижении или увеличенном обмене веществ в организме. Норма для женщин 71,2 – 142,5 нмоль/л, для мужчин 60,,00 нмоль/л.
  • TG – тиреоглобулин. Показатель уровня белка в массе ткани щитовидной железы не должен превышать 60,00 нг/мл.
  • АТ-ТПО – антитела к тиреопероксидазе. Норма не более 5,65 ед/мл.

7. Реакция связывания комплемента (РСК, Вассермана, RW)

Это проба, основанная на способности комплемента связываться с комплексами АГ-АТ. Идентифицируют образовавшийся комплекс с помощью гемолитической системы. Кардиолипиновый антиген заметно повышает чувствительность пробы.

Чувствительной является и реакция Колмера, которая заключается в выполнении при различных температурных режимах. Так, первая фаза реакции Колмера протекает при температуре 20˚С в течение получаса, вторая фаза при тепературе 4-8˚С на протяжении 20-ти часов. За это время происходит связывание комплемента.

При выполнении РСК возможно получение резко положительных результатов. Причиной, вероятно, является большой титр антител в неразведенной сыворотке. В этом случае пробы ставят с уменьшающими дозами.

Для дифференцировки стадий сифилиса и оценки эффективности противосифилитического лечения определяют количество АТ в сыворотке.

Позитивность пробы оценивают с помощью крестов, также в реакциях Вассермана, Колмера и Канна указывается разведение сыворотки.

Как расшифровать клинический анализ крови развернутый

Любая диагностика начинается с того, что назначается общий анализ крови (ОАК), который является очень информативным, хотя и самым простым. По его данным врач сможет проследить динамику выбранного метода лечения. Показатели анализа крови состоят из лейкоцитов, лейкоцитарной формулы с расшифровкой, эритроцитов, гемоглобина, СОЭ, тромбоцитов, коагулограммы на свертывание, гематокрита и цветового показателя. Чтобы понимать то, о чем расскажет врач, нужно иметь представление, что означают все эти названия:

  • лейкоциты (WBC) – кровяные тельца белого цвета, предназначенные для выполнения защиты организма;
  • незрелые гранулоциты (IG) – группа клеток лейкоцитов, имеющая специфические гранулы в своем строении;
  • лейкоформула – соотношение лейкоцитов разного вида между собой;
  • эритроциты (RBC) – кровяные тельца красного цвета, которые напитывают ткани органов кислородом;
  • свертываемость – скорость образования сгустка крови в месте несанкционированного повреждения кровеносного сосуда;
  • тромбоциты (PLT) – кровяные пластины;
  • СОЭ – скорость, с которой эритроциты оседают; показывает, сколько белков содержится в плазме крови;
  • гематокрит (НСТ) – процентное содержание эритроцитов;
  • лимфоциты (LYM) – разновидность лейкоцитов, отвечающих за состояние иммунитета;
  • цветной показатель – отражает гемограмму, сколько гемоглобина находится в эритроцитах;
  • гемоглобин (HGB) – животный белок, содержащийся в эритроцитах, имеющий красный цвет, является транспортировщиком кислорода по организму. Для женщин (г/л) этот показатель ниже, чем для мужчин (г/л). Женщины, которые находятся в интересном положении имеют средний показатель немного ниже (г/л).

Объединенные данные нормы показателей анализа крови приведены в сводной таблице:

Увеличение – грипп, краснуха, гепатит, токсоплазмоз. Уменьшение – СПИД, тяжелые инфекционные заболевания.

Выше нормы – наличие инфекции, ниже – заболевания крови.

Процентное соотношение крупных и мелких эритроцитов.

Средний объем эритроцита.

г/л новорожденные;

г/л от года до 2 лет;

г/л 3-16 лет;

г/л взрослые.

Физиологически (менструальный цикл) у женщин показатель ниже, чем у мужчин.

Содержание GB в эритроците.

0,7-0,95 дети до трех лет;

0,8-1,1 от 4 до 13 лет;

Повышение при гипотиреозе, недостатке витамина В12.

Меньше нормы при анемии.

0,11 -2,07 % женщины.

Тромбоциты MPV, PLT

* 109/л беременные женщины;

* 109/л взрослые;

* 109/л грудные дети;

* 109/л дети более 1 года.

Повышен после кровотечений, операций, при раковых заболеваниях.

Понижение при беременности, заболеваниях крови, инфекциях.

До 14 мм/ч – женщины;

до 9 мм/ч – мужчины.

Повышение от плазматической нормы – воспалительные процессы.

Гетерогенность тромбоцитов PDW

Отклонения при анемии, онкозаболевании, воспалении.

Нестабильный показатель, зависящий от времени суток, сезона, физической нагрузки, гормонального фона.

5-11% для новорожденных;

1-5% для детей и взрослых

Увеличение показателей палочки – при ангине, сепсисе, абсцессе.

Снижение – анемия, болезни печени, почек.

17-70 % дети разного возраста;

Показатель снижен при анемии, химическом отравлении.

Повышен при лейкозе, вирусных заболеваниях, туберкулезе, болезни щитовидки.

Ниже нормы при гнойных инфекциях, хроническом стрессе.

Завышен при аллергии, инфекционных заболеваниях.

Ниже нормы при беременности, стрессе, гипертиреозе.

Выше нормы при заболеваниях крови, ЖКТ, аллергии.

Ниже нормы при анемии, перед родами у женщин, отечность.

Завышена норма при обезвоживании, ожогах.

Моноциты MON абсолютное значение

0,0-0,09 *109/л взрослые;

0,05-1,1 *109/л дети.

Повышение – инфекционные болезни, туберкулез, лейкоз.

Как понять результат неспецифического обследования

Пациенты часто чувствуют себя неуверенно после теста. Сдать кровь и не мочь сделать расшифровку анализов на сифилис самостоятельно, конечно, неприятно. Расшифровка анализа крови требует медицинского образования и соответствующей квалификации врача, а также учет всех факторов, влияющих на результат. Может ли пациент самостоятельно прочесть результаты своего анализа на сифилис? Увидев отчет лаборатории, можно сделать простые выводы, но подтвердить или опровергнуть диагноз должен врач.

Проба с толуидиновым красным назначается не для диагностики, а для проверки эффективности лечения болезни. исследование показывает насколько изменилось количество антител по сравнению с предыдущим анализом. Если цифра уменьшилась, то лечение проходит успешно. Анализ проводится в процессе лечения несколько раз по назначению врача. Спустя 3 месяца после завершения процедур проводится контрольное тестирование.

Нетрепонемные тесты (РСКк, РМП и RPR) часто назначают при прохождении медосмотров и в качестве экспресс-диагностики. Существует несколько вариантов обозначений в результате исследований. Расшифровывать их достаточно просто:

  • «–» отрицательный результат
  • «+», «1+») или «++»,«2+» слабоположительный анализ
  • «+++», «3+» или «++++», «4+» положительный анализ на сифилис

Любой из результатов может быть ложноположительной или ложноотрицательной реакцией на сифилис. При отсутствии клинических симптомов и случайных сексуальных контактов отрицательный результат может быть принят врачом, как верный. Положительная реакция обычно проверяется с помощью трепонемного теста.

Расшифровка анализа крови на ВИЧ

Окончательный диагноз наличия вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) устанавливается только тогда, когда с момента контакта с инфицированным человеком пройдет не менее, чем три месяца. Для более достоверной диагностики повторную проверку анализа крови проводят через полгода. Результаты показателей будут реальными при условии, что контакт не повторялся в последующее время.

Метод ПЦР (полимеразная цепная реакция) применяют для определения ДНК вируса. При обнаружении инфекции результат обозначается фразой «реакция положительная», если ВИЧ не обнаружен – «реакция отрицательная». Иногда при невысокой квалификации лаборантов или при использовании не самого современного оборудования, могут быть найдены «лжеположительные результаты». Для подтверждения или опровержения данных утверждений, существует анализ Ф50, который находит определенные антитела только в случае проникновения ВИЧ инфекции в организм.

Достоверность анализов

Не всегда лабораторные исследования крови показывают правильный результат. Факторами, влияющими на достоверность результатов, являются беременность, хронические заболевания и аутоиммунные процессы. Показания тестов могут стать ложноположительными при приеме пациентом лекарственных препаратов.

Обнаружить наличие сифилиса могут исследования, проведенные с применением реакции Вассермана. К положительным результатам приводят вирусные заболевания (пневмония, туберкулез, малярия), нарушение работы печени, кроветворной системы. В этом случае врач выдает направление на ИФА, РПР.

  Можно ли заразиться сифилисом повторно, может ли

Анализ РМП выдает ложноположительные значения при ревматоидных процессах, циррозе печени, онкологических заболеваниях, бруцеллезе, мононуклеозе, туберкулезе, лептоспирозе.

Иммуноферментный метод также способен показать ошибочный результат при нарушенном метаболизме у пациента, наличии системных патологий, новорожденных, родившихся от инфицированных матерей. В таких случаях назначаются исследования РМП, РПГА.

Источники

  • https://VeneroMed.ru/sifilis/rasshifrovka-analiza-na-sifilis
  • https://sterilno.net/infection/stds/laboratornaya-diagnostika-sifilisa.html
  • https://venerbol.ru/sifilis/analiz-krovi.html
  • https://luchshijlekar.ru/analiz-na-gepatit/chto-takoe-kp-v-analize-na-gepatit-s.html
  • https://zpppstop.ru/zppp/sifilis/serodiagnostika.html
  • http://oscar-rostov.ru/chto-takoe-kp-v-analize-krovi/
  • https://krov.expert/analiz/venerologiya/rasshifrovka-analiza-na-sifilis.html
  • https://sifil.ru/sifilis/rasshifrovka-analiza-na-sifilis/
  • https://venerologia03.ru/sifilis/polozhitelnyj-analiz-na-treponemu.html
  • https://online-diagnos.ru/analiz/analiz-krovi-na-sifilis-rw

[свернуть]
Помогла статья? Оцените её
1 Звезда2 Звезды3 Звезды4 Звезды5 Звезд
Загрузка...